ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗА РИФОБЛАВИНА МЕТОДОМ УФ-СПЕКТРОФОТОМЕТРИИ С УЧЕТОМ ВОЗМОЖНОСТИ И УСЛОВИЙ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦЕЛЕСООБРАЗНО ВЫБРАТЬ ДЛИНУ ВОЛНЫ СВЕТА (В НМ)
1) 267 (А1%1 см = 850) (+)
2) 223 (А1%1 см = 880)
3) 370 (А1%1 см = 270)
4) 445 (А1%1 см = 316)

Для количественного определения рибофлавина удобнее работать на 267 нм: здесь удельная поглощающая способность (A_{1%1 см}) очень высокая (≈ 850), что повышает чувствительность и снижает относительную погрешность по Бугеру–Ламберту–Беру. Длина волны 223 нм хоть и даёт ещё больший отклик, но лежит в глубоком УФ, где часто интенсивно поглощают растворители (вода, буферы, спирты) и вспомогательные вещества, поэтому возрастает риск матричных помех и дрейфа нулевой линии. В видимой области (370–445 нм) спектральные помехи меньше, но чувствительность падает из-за низких A_{1%1 см}, что менее выгодно для рутинного количественного анализа.

На практике выбирают 267 нм и регулируют разведение и кювету 1 см для попадания в линейный диапазон (обычно A ≈ 0,2–0,8). Контролируют pH (избегая флуктуаций спектра), используют подходящий растворитель с высоким cut-off -порогом прозрачности и проводят холостой опыт. Это обеспечивает хорошую воспроизводимость при высокой чувствительности и приемлемой селективности.

Длина волны, нм	Область спектра	A1%1 см	Чувствительность	Типичные помехи	Комментарий / Применимость
223	Глубокий УФ	880	Очень высокая	Растворители, белки, вспом. вещества	Высокий риск матричных помех; осторожно с выбором растворителя
267 (выбор)	УФ	850	Очень высокая	Менее выражены, чем на 223 нм	Оптимум чувствительность/селективность для количественного анализа
370	Ближний УФ/видимая	270	Умеренная	Меньше матричных помех	Подходит при сильных УФ-помехах, но ниже чувствительность
445	Видимая	316	Умеренная	Минимальные, хороший фон	Более селективно, но чувствительность ниже, чем на 267 нм
Рекоменд. диапазон A	—		0,2–0,8	—	Обеспечивает лучшую линейность и S/N
pH/растворитель	—		—	Сдвиг максимумов при изменении pH	Использовать буфер с высоким cut-off-порогом прозрачности