ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ РАЗДЕЛЕНИЯ КОМПОНЕНТОВ ПРИ КАПИЛЛЯРНОМ ЗОННОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗЕ ДОБАВЛЯЮТ
1) фосфатный буфер
2) этанол
3) поверхностно-активные вещества (+)
4) уксусную кислоту
Для повышения воспроизводимости и селективности в капиллярном зонном электрофорезе действительно используют поверхностно-активные вещества (ПАВ). Они динамически модифицируют стенку кварцевого капилляра, подавляют неспецифическую адсорбцию белков и других амфифильных молекул, регулируют электросмос и, при концентрациях около ККМ, формируют мицеллы, что позволяет тонко управлять временем миграции и разрешением близких зон. За счёт этого снижается хвостирование , стабилизируется базовая линия и улучшается разделение аналитически значимых компонентов.
Буфер (фосфатный или ацетатный) и органические модификаторы вроде этанола важны для контроля pH, ионной силы и вязкости, однако сами по себе они не устраняют проблемы сорбции на стенке и не дают той степени настройки селективности, которую обеспечивает добавление ПАВ (анионных — напр. SDS, катионных — CTAB, или нейтральных — Brij). Поэтому для оптимизации именно разделения, а не только условий миграции, выбор ПАВ — клинически и аналитически оправдан.
| Добавка | Основная цель | Типичный диапазон конц. | Влияние на электросмос/селективность | Примечания |
|---|---|---|---|---|
| ПАВ (анионные, напр. SDS) (верный ответ) | Динамическое покрытие стенки, подавление адсорбции, тонкая настройка селективности | 5–100 мМ (около/выше ККМ) | Снижает/стабилизирует ЭОП; мицеллы создают псевдо-стационарную фазу | При высоких конц. режим может переходить в МЭК (мицеллярная ЭК) |
| ПАВ (катионные, напр. CTAB) | Инверсия заряда стенки, уменьшение взаимодействий кислых белков | 0.1–10 мМ | Может инвертировать направление ЭОП | Чувствительны к pH и примесям |
| ПАВ (неионные, напр. Brij/Tween) | Смягчение гидрофобных взаимодействий без влияния на заряд | 0.01–1% | Минимально влияет на ЭОП; умеренно меняет селективность | Подходит для чувствительных белков/пептидов |
| Фосфатный буфер | Поддержание pH и ионной силы | 10–100 мМ | Косвенно влияет на ЭОП через ионную силу | Высокая проводимость → рост джоулева нагрева |
| Уксусная кислота/ацетатный буфер | Слабокислая среда, стабилизация аминов/малых оснований | 10–100 мМ | Умеренно снижает ЭОП при низком pH | Меньшая проводимость, чем у фосфатов |
| Этанол/метанол (орг. модификаторы) | Регулировка вязкости и диэлектрической проницаемости | 5–30% (v/v) | Замедляет ЭОП, может улучшать разрешение | Слишком много — рост времени анализа |
| ПолиВП (PVP), метилцеллюлоза | Динамическое покрытие, подавление адсорбции | 0.01–0.5% | Снижает/стабилизирует ЭОП | Повышает вязкость, сглаживает пики |
| Циклодекстрины | Хиральная/включённая селекция для изомеров | 1–50 мМ | Меняет селективность без сильного влияния на ЭОП | Полезны для энантиоселективного разделения |
Итог: для практической оптимизации разделения в КЗЭ ключевым инструментом являются ПАВ — они расширяют окно селективности и повышают качество пиков без сложной перенастройки методики.