ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ РАЗДЕЛЕНИЯ В КАПИЛЛЯРНОМ ЗОННОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗЕ ИСПОЛЬЗУЮТСЯ ТАКИЕ ПАРАМЕТРЫ, КАК ТИП И _____ БУФЕРНОГО РАСТВОРА
1) полярность
2) напряжение
3) температура
4) концентрация (+)
В капиллярном зонном электрофорезе очень важно правильно подобрать не только состав, но и концентрацию буферного раствора. От нее зависят ионная сила, электропроводность, величина электрофоретической подвижности аналитов и скорость электроосмотического потока. При слишком низкой концентрации буфера пики становятся размытыми , ухудшается воспроизводимость и возрастает влияние изменений pH. При слишком высокой — растёт ток, капилляр перегревается, появляются искажения пиков и снижается эффективность разделения. Поэтому для анализа лекарственных веществ всегда подбирают узкий диапазон концентраций буфера, при котором достигаются чёткие, хорошо разделённые пики и приемлемое время анализа.В технологических и аналитических методиках для фармацевтических субстанций и готовых лекарственных форм обычно оптимизируют тип буфера (например, борный, фосфатный, TRIS и др.) и именно его концентрацию, добиваясь устойчивого pH, приемлемого тока и максимального разрешения между близкими по структуре соединениями (изомерами, примесями, продуктами деградации). Это особенно важно при контроле качества, где нужно уверенно отделить примеси от основного действующего вещества и корректно оценить их содержание.
| Параметр | Что регулирует | При увеличении параметра | Риски при неправильном выборе |
|---|---|---|---|
| Тип буфера | Диапазон pH, взаимодействие с аналитом, стабильность системы | Меняется профиль зарядов молекул и электроосмотический поток | Смещение pH, коагуляция, нестабильность сигналов, плохое разделение |
| Концентрация буфера | Ионная сила, проводимость, форма и разрешение пиков | Растёт ток, уменьшается влияние колебаний pH, возможен перегрев | Размытые пики (слишком низкая) или перегрев и искажение пиков (слишком высокая) |
| pH буфера | Степень ионизации лекарственных веществ, их заряд и подвижность | Может измениться знак и величина заряда аналита | Слияние пиков, изменение порядка элюирования, неверная количественная оценка |
| Напряжение | Скорость миграции зон и время анализа | Сокращается время анализа, возрастает ток | Перегрев, деформации пиков, снижение эффективности разделения |
| Температура | Вязкость буфера, подвижность и стабильность аналитов | Снижается вязкость, увеличивается скорость миграции | Нестабильность температурного профиля, дрейф времени удерживания |
| Диаметр капилляра | Уровень нагрева и чувствительность детектирования | При меньшем диаметре уменьшается перегрев, улучшается эффективность | Слишком большой диаметр — перегрев; слишком малый — сложность в работе и засорение |
| Состав матрицы образца | Взаимодействие с буфером, возможные матричные эффекты | Повышается риск сопутствующих ионов, влияющих на форму пиков | Искажение количественных результатов, появление дополнительных пиков |
