ГИДРОСТАТИЧЕСКОЕ ВВЕДЕНИЕ ПРОБЫ В КАПИЛЛЯРНОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗЕ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ
1) при помощи вакуума
2) благодаря напряжению
3) при помощи давления
4) за счет разного уровня буферных растворов (+)
Гидростатическое введение пробы в капиллярном электрофорезе основано на разности гидростатических давлений, которая возникает из-за разного уровня жидкостей в резервуарах с буфером. Если один конец капилляра находится в растворе на более высоком уровне, столб жидкости создаёт перепад давления, и проба самопроизвольно перемещается в капилляр без участия электрического поля.
С практической точки зрения это мягкий и воспроизводимый способ дозирования: объём вводимой пробы зависит от высоты перепада уровней (Δh), времени введения, вязкости раствора и внутреннего диаметра капилляра. Важно отличать его от вакуумного/давления (это уже принудительное пневматическое введение) и от электрокинетического введения (там главную роль играет напряжение и свойства ионов, что может давать смещение состава пробы).
| Способ введения пробы | Движущая сила | Как реализуют на приборе | Что в итоге контролирует объём | Плюсы | Минусы/риски | Когда особенно уместно (фармац.) |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Гидростатическое (разный уровень растворов) | Перепад гидростатического давления из-за Δh | Поднимают/опускают один резервуар или используют разную высоту сосудов | Δh, время, вязкость, диаметр капилляра, температура | Минимальная селективность по заряду; меньше искажение состава пробы | Чувствительно к точности высоты и времени; влияние вязкости | Сравнительные анализы растворов ЛС, где важно не перетянуть более подвижные ионы |
| Пневматическое (давление) | Избыточное давление (положительное) | Подача давления на один конец капилляра (bar/psi) | Давление, время, вязкость, диаметр капилляра | Быстро, удобно для вязких матриц, хорошо автоматизируется | Риск пузырьков/микроутечек, чувствительность к чистоте соединений | Контроль качества сиропов/суспензий после подготовки, когда проба более вязкая |
| Пневматическое (вакуум) | Разрежение (отрицательное давление) | Создают вакуум на выходе капилляра, подтягивая пробу | Вакуум, время, вязкость, диаметр капилляра | Меньше механической нагрузки на входе; удобно при некоторых конфигурациях | Пузырьки, нестабильность при негерметичности, требования к обслуживанию | Рутинные серии, где приборно проще реализовать разрежение на выходе |
| Электрокинетическое (напряжение) | Электрическое поле + электроосмотический поток | Кратковременно прикладывают напряжение при контакте капилляра с пробой | Напряжение, время, проводимость, заряд/подвижность аналитов, EOF | Высокая чувствительность для ионных компонентов, малые объёмы | Селективность по заряду: состав вводимой зоны может отличаться от исходной пробы | Следовые количества ионов/примесей, когда допустима электрическая селекция |
| Ключевой контроль качества при введении | — | Проверка уровней, времени, температуры; промывка капилляра; контроль пузырьков | Повторяемость зоны ввода и стабильность EOF/буфера | Снижение RSD по площади/времени миграции, меньше брака серии | Игнорирование мелочей даёт плавающие результаты и смещение количественного анализа | Валидация методики и серийный выпуск (QC) по фармакопейным требованиям |
