МЕТОД ВЕСТЕРН-БЛОТ ИСПОЛЬЗУЮТ ДЛЯ ОЦЕНКИ ПОДЛИННОСТИ И ЧИСТОТЫ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ
1) высокоочищенных белков (+)
2) высокоочищенных сахаров
3) высокоочищенных липидов
4) неочищенных белков

Вестерн-блот — это иммунологический метод, который специфически выявляет и количественно оценивает белки по их молекулярной массе и взаимодействию с антителами. Поэтому им подтверждают подлинность и контролируют чистоту именно белковых биопрепаратов (высокоочищенных протеинов): наличие “правильной” полосы по ожидаемой мол. массе у эталона и образца, отсутствие посторонних белковых примесей и деградационных фрагментов, а также сопоставимая интенсивность сигнала. Сахара и липиды данным методом не детектируются — для них применяют HPLC/GC, масс-спектрометрию, TLC и др.

Вестерн-блот в контроле подлинности и чистоты белковых ИЛП

Этап	Что делают	Цель (подлинность/чистота)	Контроль/стандарт	Критерии оценки	Типичные артефакты
Подготовка образца	Буфер, восстановитель, денатурация	Сопоставимость с эталоном	Эталон белка/референс-стандарт	Стабильный образец без агрегации	Деградация, агрегация при нагреве
SDS-PAGE	Электрофорез по мол. массе	Разделение мономера/фрагментов	Маркеры мол. массы	Полоса в ожидаемом диапазоне kDa	Смазывание, “улыбка” геля
Перенос (блоттинг)	Трансфер на нитроцеллюлозу/ПВДФ	Сохранение профиля белков	Контроль эффективности переноса	Равномерный перенос без потерь	Неполный перенос, “потери” высоко-/низкомол.
Блокирование	БСА/молоко для снижения фона	Чистота сигнала	Пустой канал/бланк	Низкий неспецифический фон	Высокий фон, “шумные” мембраны
Первичные антитела	Антитела к целевому белку/эпитопу	Подтверждение подлинности (специфичность)	Положительный и отрицательный контроль	Сигнал только у целевой полосы	КРосс-реактивность, слабая аффинность
Вторичные антитела + детекция	HRP/AP, хемилюминесценция	Качеств./полуколич. оценка	Серия разведений образца	Линейность сигнала в диапазоне	Пересыщение, неравномерная экспозиция
Анализ полос	Сравнение с эталоном/ПО для денсито-метрии	Чистота: отсутствие лишних полос	Эталонная полоса целевого белка	Единичная специф. полоса, минимальные примеси	Деградационные фрагменты, димеры
Заключение	Сводка соответствия спецификациям	Подлинность подтверждена, чистота достаточна	Соответствие SOP/рег. требованиям	Совпадение массы и сигнала с эталоном	При несоответствии — повторное тестирование

Итог: метод применяют для высокоочищенных белков (вариант 1), где он достоверно подтверждает идентичность и позволяет оценить чистоту по профилю полос.