ПОД ЭЛЕКТРОФОРЕЗОМ ПОНИМАЮТ МЕТОД АНАЛИЗА, ОСНОВАННЫЙ НА СПОСОБНОСТИ ЗАРЯЖЕННЫХ ЧАСТИЦ К ПЕРЕМЕЩЕНИЮ В
1) электрическом поле (+)
2) коллоидном растворе
3) магнитном поле
4) растворе
Правильный ответ: перемещение заряжённых частиц происходит в электрическом поле. Электрофорез используют для разделения и анализа белков, пептидов, нуклеиновых кислот и лекарственных веществ-электролитов по знаку и величине заряда, а также по размеру. Скорость миграции пропорциональна напряжённости поля и электрофоретической подвижности, которая зависит от заряда частицы, её гидродинамического радиуса и вязкости среды; важна и ζ-потенциал поверхностей (особенно в капиллярном формате).
Коллоидный раствор или просто раствор без приложения поля не обеспечивает направленного движения, а магнитное поле влияет лишь на магниточувствительные частицы (что не есть классический электрофорез). В фармпрактике критичны выбор буфера (pH ↔ степень ионизации аналита), ионная сила (экранование заряда), матрица (агароза/ПААГ/капилляр), контроль нагрева и визуализация (кумасси, серебрение, флуоресценция). Это позволяет контролировать чистоту субстанций, подтверждать подлинность биополимеров и оценивать стабильность препаратов.
| Параметр | Что означает | Типичные варианты | Влияние на миграцию/результат | Примечание для фармацевта |
|---|---|---|---|---|
| Поле (E, В/см) | Напряжённость электрического поля | 5–20 В/см (гелевые), до кВ/м (капилляр) | ↑E → ↑скорости, но ↑нагрев и риск подплывания зон | Следить за стабилизацией тока/мощности |
| Заряд и размер частицы | Эффективный заряд и гидродиаметр | Белки, пептиды, ДНК/РНК, ионные ЛВ | ↑|q| → быстрее; ↑размер → медленнее | Для белков применяют денатурацию SDS для выравнивания q/m |
| Буфер (pH) | Среда, задающая степень ионизации | ТАЕ/ТБЕ (ДНК), Tris-Gly (SDS-PAGE) | Смещение pH меняет заряд аналита и направление миграции | Контролировать свежесть/ёмкость буфера |
| Ионная сила | Концентрация ионов в буфере | 0.05–0.1 М (гелевые) | ↑Ионная сила → ↓напряжение на геле, ↑нагрев | Не завышать — ухудшится разрешение |
| Матрица | Физическая среда разделения | Агароза, ПААГ, бумага, капилляр | Определяет ситацию и диапазон масс | Выбор под размер молекул и цель анализа |
| Температура | Нагрев из-за джоулева тепла | Охлаждение, термостаты | Перегрев → диффузия, искажение полос | Держать стабильной для воспроизводимости |
| Электроосмос | Поток растворителя к катоду | Заметен в капиллярах кремнезёма | Сдвигает все зоны, влияет на время миграции | Регулируется pH/покрытиями стенок |
| Визуализация | Методы обнаружения зон | Кумасси, серебрение, EtBr, SYBR, УФ-детекторы | Чувствительность/специфичность различаются | Учитывать безопасность (EtBr — мутаген) |
| Калибровка | Маркерные стандарты | Ладдеры ДНК, стандарты масс белков | Позволяет оценить размер/мол. массу | Обязательно для количественных выводов |
| Применения | Задачи анализа в фарме | Идентификация, чистота, стабильность, контроль примесей | Высокое разрешение и специфичность разделения | Часть регламентных методов контроля качества |
