ПРАВИЛЬНОЙ ОЧЕРЁДНОСТЬЮ СЛОЁВ СЭНДВИЧА ДЛЯ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ПЕРЕНОСА ПРИ ПРОВЕДЕНИИ АНАЛИЗА МЕТОДОМ ВЕСТЕРН-БЛОТ (ПО НАПРАВЛЕНИЮ ОТ КАТОДА К АНОДУ) ЯВЛЯЕТСЯ
1) гель, фильтровальная бумага, мембрана, фильтровальная бумага
2) фильтровальная бумага, мембрана, гель, фильтровальная бумага
3) фильтровальная бумага, гель, мембрана, фильтровальная бумага (+)
4) фильтровальная бумага, гель, фильтровальная бумага, мембрана

Правильная укладка сэндвича для переноса белков при вестерн-блотинге (от катода к аноду) такова: фильтровальная бумага → гель → мембрана → фильтровальная бумага. Так белки, заряженные в буфере отрицательно при стандартном pH, движутся к аноду и первым делом попадают на мембрану, а не теряются в прослойках. Перед сборкой удаляют пузыри, выравнивают края, полностью смачивают прокладки и подготавливают мембрану: ПВДФ активируют в метаноле и затем переносят в буфер, нитроцеллюлозу — просто в буфер.

Остальные варианты ошибочны: в (1) мембрана лежит со стороны анода неверно относительно геля — часть белков останется в геле или уйдёт в бумагу; в (2) мембрана помещена между бумагой и гелем со стороны катода , что препятствует корректному захвату белков; в (4) мембрана вынесена за верхнюю прокладку и фактически не контактирует с гелем — перенос сорвётся.

Слой/элемент	Позиция (от катода → к аноду)	Назначение	Что важно при подготовке	Типичные ошибки
Фильтровальная бумага (катодная прокладка)	1 (самый катодный слой)	Равномерный контакт и доставка буфера/тока к гелю	Полное смачивание в буфере, отсутствие складок/пузырей	Сухие зоны → локальные провалы переноса
Гель	2	Источник разделённых белков	Срезать кладочный край, не допускать пузырей на поверхности	Неплотный контакт с мембраной → смаз/двойные полосы
Мембрана (ПВДФ или нитроцеллюлоза)	3 (между гелем и анодной бумагой)	Ковалентный/гидрофобный захват белков для дальнейшего иммунодетектирования	ПВДФ: 10–15 с в метаноле → буфер; НЦ: сразу в буфер; без пузырей	Неправильная сторона/перепутанная ориентация → слабый сигнал
Фильтровальная бумага (анодная прокладка)	4 (самый анодный слой)	Равномерное распределение тока, фиксация бутерброда	Полное смачивание, ровное прилегание	Сдвиг пакета при сборке → тени , перекос полос
Буфер переноса	Окружает пакет	Обеспечивает проводимость и перенос (Tris-Gly/метанол)	Концентрация метанола 10–20% (ПВДФ — чаще 20%)	Слишком много метанола → плохой выход больших белков
Режим переноса	Параметры	Перемещение белков к аноду через мембрану	Мокрый: 0.2–0.3 A, 60–90 мин; полусухой: согласно инструкции блока	Перегрев → выдувание полос; недоперенос крупных белков