ПРИ КОЛИЧЕСТВЕННОМ ОПРЕДЕЛЕНИИ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ СУБСТАНЦИЙ МЕТОДОМ УФ-СПЕКТРОФОТОМЕТРИИ РАСЧЕТ СОДЕРЖАНИЯ ПРОВОДЯТ ПО
1) величине показателя преломления раствора
2) значению удельного показателя поглощения (+)
3) величине удельного вращения
4) площадям основных пиков у анализируемого и стандартного растворов
При количественном определении методом УФ-спектрофотометрии содержание вещества рассчитывают по интенсивности поглощения света на выбранной длине волны, а затем переводят эту величину в концентрацию через калибровочную зависимость или через удельный показатель поглощения (E1%1см). Удельный показатель поглощения — это паспортная характеристика вещества в заданной среде: он связывает оптическую плотность (A), толщину кюветы (l) и концентрацию (c), поэтому по нему корректно выполнять расчёт содержания при соблюдении условий методики (растворитель, pH, длина волны, кювета 1 см, отсутствие посторонних хромофоров).
Другие варианты относятся к иным аналитическим подходам: показатель преломления — к рефрактометрии, удельное вращение — к поляриметрии, а площади пиков — к хроматографическим методам (ВЭЖХ/ГХ), где сравнивают отклики по пикам. В УФ-спектрофотометрии ключевой измеряемой величиной остаётся поглощение, и именно поэтому расчёт ведут по удельному показателю поглощения либо по калибровочному графику, полученному на основе него.
| Параметр / метод | Что измеряют | Где применяется | Для чего подходит в фарманализе | Типичный расчёт |
|---|---|---|---|---|
| УФ-спектрофотометрия | Оптическую плотность A (поглощение) | Растворы, хромофорные группы, контроль примесей/идентификация/количественно | Быстрое определение содержания при известной специфичности и отсутствии мешающих поглощающих веществ | A = E1%1см · c · l (или по калибровке) |
| Удельный показатель поглощения (E1%1см) | Сила поглощения 1% раствора в кювете 1 см | Фармакопейные методики УФ при фиксированных условиях | Перевод A в концентрацию без построения отдельной калибровки (если допускается методикой) | c = A / (E · l) |
| Рефрактометрия | Показатель преломления n | Смеси, растворы, контроль концентрации некоторых жидкостей | Оценка концентрации по n, если есть градуировка; не является базой для УФ-расчёта | c = f(n) по градуировке |
| Поляриметрия | Угол вращения плоскости поляризации (удельное вращение) | Оптически активные вещества (сахара, некоторые АФС) | Контроль подлинности/концентрации оптически активных соединений; не относится к УФ-спектрофотометрии | [α] = α / (l·c) и обратный расчёт c |
| ВЭЖХ/ГХ (хроматография) | Площади/высоты пиков (отклик детектора) | Сложные смеси, примеси, многокомпонентные препараты | Точное количественное определение по сравнению со стандартом; это другой методический подход | Cx = (Sx/Sst)·Cst·(коэф. разведения) |
| Практические условия УФ-определения | Стабильность раствора, длина волны, чистота растворителя, отсутствие мутности | Любые УФ-методики фарманализа | Снижение систематических ошибок (постороннее поглощение, рассеяние, смещение λmax) | Контроль холостого раствора, корректные разведения, кювета 1 см |