ПРИ КОЛИЧЕСТВЕННОМ ОПРЕДЕЛЕНИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ РАСЧЕТ СОДЕРЖАНИЯ ПРОВОДЯТ ПО
1) величине площадей основных пиков у испытуемого и стандартного растворов (+)
2) значению удельного показателя поглощения
3) времени удерживания основных пиков у испытуемого и стандартного растворов
4) величине удельного вращения вещества
В количественном анализе методом ВЭЖХ содержание вещества рассчитывают по площадям пиков, так как интеграл сигнала пропорционален количеству аналита, прошедшего через детектор. При использовании внешнего стандарта строят калибровку или напрямую сопоставляют площади пиков испытуемого и стандартного растворов с учётом разведений и коэффициента отклика — это обеспечивает линейность и точность, в отличие от времени удерживания (идентификационный признак) или удельных оптических характеристик, не отражающих количество в инжектируемой пробе.
| Параметр | Назначение | Единицы/особенности | Практическая заметка |
|---|---|---|---|
| Площадь пика | Количественный расчёт (верный критерий) | a.u.·s, пропорциональна количеству | Используется с внешним/внутренним стандартом |
| Высота пика | Оценка чувствительности/перегрузки | a.u. | Чувствительна к уширению, реже для расчёта |
| Время удерживания | Идентификация соединения | мин | Не используют для количественного подсчёта |
| Коэффициент отклика | Исправляет разные отклики детектора | Безразмерный | Нужен при множественных аналитов/ИС |
| Внутренний стандарт (ИС) | Компенсация потерь/вариабельности инъекции | Отношение площадей Aан/AИС | Выбирают пик, не перекрывающийся с аналитом |
| Калибровочный график | Пересчёт площади в концентрацию | Линейная/взвешенная регрессия | Проверяют R², остатки, диапазон линейности |
| Разрешение пиков (Rs) | Оценка разделения | Безразмерный (>1.5 — базовое) | Недоразделение искажает площади |
| Теоретические тарелки (N) | Эффективность колонки | Безразмерный | Падение N — признак деградации или перегрузки |
| Асимметрия/фактор формы | Контроль искажений пиков | Tailing factor (~1.0–1.5) | Сильный хвост влияет на интеграцию |
| Пределы LOD/LOQ | Чувствительность метода | S/N≈3 (LOD), S/N≈10 (LOQ) | Определяют условия применимости |
Итог: для расчёта содержания при ВЭЖХ берут именно площади основных пиков испытуемого и стандартного растворов, применяя калибровку и учёт факторов отклика; остальные показатели служат для идентификации и контроля качества разделения, но не для количественного пересчёта.