ПРИНЦИПОМ КАПИЛЛЯРНОГО ГЕЛЬ-ЭЛЕКТРОФОРЕЗА ЯВЛЯЕТСЯ РАЗДЕЛЕНИЕ
1) соединений при использовании поверхностно-активных веществ
2) путем включения в систему хиральных селекторов
3) в режиме поддержания постоянства тока
4) электрофоретическое в полимере (+)
Капиллярный гель-электрофорез основан на электрофоретическом разделении молекул внутри полимерной (гелевой) матрицы, заполняющей капилляр. Полимер работает как сито : чем крупнее и менее подвижна частица (например, фрагмент ДНК или белок), тем сильнее она задерживается в порах геля и тем медленнее мигрирует, поэтому компоненты расходятся по времени выхода из капилляра.
Практически это даёт высокую разрешающую способность именно за счёт размера/формы и эффективной подвижности в полимере, а не за счёт ПАВ (это характернее для мицеллярной электрокинетической хроматографии), не за счёт хиральных селекторов (это подходы хирального разделения), и не по определению из-за режима постоянного тока (это лишь вариант электрического режима, который сам по себе не является принципом метода).
| Параметр | Что используется в капиллярном гель-электрофорезе | Зачем это нужно | Типичный эффект на разделение |
|---|---|---|---|
| Разделяющая среда | Полимерная матрица (гелевый/полимерный раствор в капилляре) | Создаёт ситовой механизм (разный тормозящий эффект для молекул) | Высокое разрешение по размеру; крупные молекулы мигрируют медленнее |
| Движущая сила | Электрическое поле (электрофорез в капилляре) | Обеспечивает управляемую миграцию заряжённых частиц | Различия в электрофоретической подвижности превращаются во временное разделение пиков |
| Ключевой механизм | Сито полимера: размер/конформация ↔ сопротивление миграции | Разводит компоненты, которые в свободном растворе разделялись бы хуже | Узкие пики и хорошее разделение близких по свойствам фрагментов |
| Объекты анализа | ДНК/РНК-фрагменты, белки (в т.ч. по размеру), некоторые полимеры | Удобно для контроля качества, профилирования, сравнения образцов | Чёткое ранжирование по длине/молекулярной массе (при корректной матрице) |
| Влияющие факторы | Концентрация/тип полимера, напряжение, буфер и его pH, температура | Настройка вязкости, размера пор и стабильности миграции | Более плотная матрица ↑разрешение для малых фрагментов, но ↑время анализа |
| Чем НЕ является принцип | ПАВ-мицеллы; хиральные селекторы; сам по себе режим постоянного тока | Это отдельные подходы/режимы для других задач или вариантов методик | Могут применяться в иных методах, но не определяют гель-разделение в капилляре |
