СЕЛЕКТИВНОСТЬ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ КОЛОНКИ ЗАВИСИТ ОТ
1) размеров и материала, из которого сделана колонка
2) способов запуска анализируемой пробы
3) вида анализируемого объекта (биожидкость, извлечение из объекта)
4) полярности вещества и полярности неподвижной жидкой фазы (+)
Селективность колонки в жидкостной или газовой хроматографии определяется тем, насколько по-разному молекулы анализируемых веществ взаимодействуют с неподвижной фазой. Поэтому решающим фактором является сочетание полярности анализируемого вещества и полярности жидкой неподвижной фазы: похожее растворяется в похожем , а различия в сродстве (адсорбции/растворимости) дают различия во времени удерживания. Для фармацевта это видно, например, при разделении двух близких по структуре лекарств: изменение только полярности неподвижной фазы (смена типа колонки) сразу меняет порядок выхода пиков и способность колонки разнести эти вещества.
Размеры и материал корпуса колонки, а также режим ввода пробы и природа матрицы (биожидкость, экстракт и т.д.) влияют на эффективность, чувствительность, возможные помехи и износ колонки, но сами по себе не задают селективность; они лишь модифицируют уже заданное взаимодействием вещество – неподвижная фаза . Поэтому, когда нужно улучшить именно селективность (лучше разнести пики близких по структуре примесей или изомеров), в первую очередь подбирают тип неподвижной фазы по полярности и химическому характеру взаимодействий с анализируемыми веществами.
| Фактор | Прямое влияние на селективность | Основное действие | Пример для фарманализа |
|---|---|---|---|
| Полярность вещества | Да | Определяет силу взаимодействия с неподвижной фазой | Разделение кислых, основных и нейтральных ЛВ |
| Полярность неподвижной жидкой фазы | Да (ключевой фактор) | Задает характер взаимодействий: гидрофобные, диполь-диполь, водородные связи | Выбор С18, С8, фенильной, цианопропильной колонки |
| Размеры колонки (длина, диаметр) | Косвенно | Влияют на эффективность, высоту теоретической тарелки, время анализа | Сокращение длины ради ускорения анализа без смены селективности |
| Материал корпуса колонки | Нет (при исправной колонке) | Определяет химическую устойчивость (нержавеющая сталь, PEEK и т.д.) | Выбор инертного материала при работе с белками или агрессивными элюентами |
| Способ ввода пробы | Практически нет | Влияет на форму пика, воспроизводимость и перегрузку колонки | Автоинжектор vs ручной ввод, различия в воспроизводимости площадей пиков |
| Тип объекта (плазма, моча, экстракт таблетки) | Косвенно | Может вносить матричные эффекты и помехи, но селективность колонки задается фазой | Очистка биожидкости перед анализом для уменьшения помех |
| Состав подвижной фазы (элюента) | Да, регулирует проявление селективности | Меняет силу элюирования и относительные времена удерживания | Градиент ацетонитрил/буфер для оптимизации разделения примесей |
Таким образом, при оптимизации метода фарманализа для улучшения селективности в первую очередь подбирают неподвижную фазу по полярности и типу взаимодействий с веществами, а затем уже корректируют элюент, размеры колонки и условия ввода пробы.